2021年9月3日，GB 23200.121-2021《植物源性食品中331種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》正式實施。該標(biāo)準(zhǔn)適用于植物源性食品中331種農(nóng)藥及其44個代謝物(共計375種組分)殘留量的測定，是國內(nèi)首個單針測定農(nóng)藥殘留品種最多的LC-MS/MS國標(biāo)，采用GB2763標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，權(quán)威性更強，涉及數(shù)量多，種類繁，既涉及到劇毒禁用有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥，又涉及到常用農(nóng)藥品種如三唑類殺菌劑及苯甲酰脲類殺蟲劑，覆蓋范圍廣，同時涉及食用菌、水果、蔬菜、糖料、糧食、油料作物、茶葉、堅果和香辛料、植物油類12大類農(nóng)產(chǎn)品，全面覆蓋植物源性食品。
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珀金埃爾默公司參照GB 23200.121-2021標(biāo)準(zhǔn)，建立了完善的分析方法及相應(yīng)的整體解決方案，可直接進行方法的轉(zhuǎn)移，無需進行方法開發(fā)，大大提高分析效率，同時可獲得優(yōu)異的靈敏度，完全滿足實驗室的分析要求。
實驗方法
樣品處理
蔬菜和水果的取樣量按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定執(zhí)行，食用菌樣品隨機取樣1 kg。樣品取樣部位按照GB 2763的規(guī)定執(zhí)行。對于個體較小的樣品，取樣后全部處理；對于個體較大的基本均勻樣品，可在對稱軸或?qū)ΨQ面上分割或切成小塊后處理；對于細(xì)長、扁平或組分含量在各部分有差異的樣品，可在不同部位切取小片或截成小段后處理；取后的樣品將其切碎，充分混勻，用四分法取樣或直接放入組織搗碎機中搗碎成勻漿，放入聚乙烯瓶中。
取谷類樣品500 g，粉碎后使其全部可通過425 μm的標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)篩，放入聚乙烯瓶或袋中。取油料、茶葉、堅果和香辛料各500 g，粉碎后充分混勻，放入聚乙烯瓶或袋中。
植物油類攪拌均勻，放入聚乙烯瓶中。
樣品貯存
將試樣按照測試和備用分別存放。于-18°C條件下保存。
樣品處理
• 蔬菜、水果、食用菌和糖料
稱取10 g試樣 (精確至0.01 g)于50 mL塑料離心管中，加入10 mL乙腈、4 g硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g檸檬酸鈉、0.5 g檸檬酸氫二鈉及1顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，劇烈震蕩1 min后4200r/min離心5 min。吸取一定量上清液至內(nèi)含除水劑和凈化材料的塑料離心管中(每毫升提取液使用150 mg無水硫酸鎂、25 mg PSA)；對于顏色較深的試樣，離心管中另加入GCB(每毫升提取液使用2.5 mg)，渦旋混勻1 min。4200 r/min離心5 min，吸取上清液過微孔濾膜，用于測定。
• 谷物、油料和堅果
稱取5 g試樣(精確至0.01g)于50 mL塑料離心管中，加10 mL水渦旋混勻，靜置30 min。加入15 mL乙腈-醋酸溶液、6 g無水硫酸鎂、1.5 g醋酸鈉及1顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，劇烈震蕩1 min后4200 r/min離心5 min。吸取一定量上清液至內(nèi)含除水劑和凈化材料的塑料離心管中(每毫升提取液使用150 mg無水硫酸鎂、50 mg C18和50 mgPSA)，渦旋混勻1 min。4200 r/min離心5 min，吸取上清液過微孔濾膜，用于測定。
• 茶葉和香辛料
稱取2 g試樣 (精確至0.01 g)于50 mL塑料離心管中，加10 mL水渦旋混勻，靜置30 min。加入15 mL乙腈-醋酸溶液、6 g無水硫酸鎂、1.5 g醋酸鈉及1顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，劇烈震蕩1 min后4200 r/min離心5 min。吸取一定量上清液至內(nèi)含除水劑和凈化材料的塑料離心管中(每毫升提取液使用150 mg無水硫酸鎂、50 mg C18、50 mgPSA和25 mg GCB)，渦旋混勻1 min，4200 r/min離心5 min，吸取上清液過微孔濾膜，用于測定。
• 植物油
稱取2 g試樣 (精確至0.01 g)于50 mL塑料離心管中，加入5 mL水。加入10 mL乙腈、4 g硫酸鎂、1 g氯化鈉、1 g檸檬酸鈉、0.5 g檸檬酸氫二鈉及1顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，劇烈震蕩1 min后4200 r/min離心5 min，吸取一定量上清液至內(nèi)含除水劑和凈化材料的塑料離心管中 (每毫升提取液使用150 mg無水硫酸鎂、50 mg C18和50 mgPSA)，渦旋混勻1 min。4200 r/min離心5 min，吸取上清液過微孔濾膜，用于測定。(注：測定磺酰脲類除草劑、環(huán)己烯酮類除草劑 (烯草酮、烯草酮砜、烯草酮亞砜、噻草酮、三甲苯草酮、烯禾啶)、三唑并嘧啶磺酰胺類除草劑(雙氟磺草胺、唑嘧磺草胺、五氟磺草胺)、氟啶胺、螺蟲乙酯及其代謝物、甲磺草胺、苯嘧磺草胺、苯噻隆、氰霜唑代謝物CCIM和導(dǎo)噁唑草酮-二酮腈時，PSA的用量降低至每毫升提取液5 mg(蔬菜、水果、食用菌、糖料、植物油)和10 mg(谷物、油料、堅果)。
LC-MS/MS儀器方法
珀金埃爾默LX50 UHPLC參數(shù)
色譜柱：Brownlee SPP C18 100x2.1 mm，2.7 μm(貨號：N9308404)
柱溫：40°C
流速：0.3 mL/min
進樣量：2 μL
表1.375種農(nóng)殘類化合物的液相色譜梯度洗脫表
質(zhì)譜參數(shù)
儀器采用珀金埃爾默QSight 210三重四極桿質(zhì)譜儀，離子源參數(shù)及目標(biāo)化合物質(zhì)譜參數(shù)見表2和表3(見附件)。
表2.質(zhì)譜離子源參數(shù)
結(jié)果與討論
本方法采用一針進樣，通過Time Managed MRM正負(fù)切換模式同時測定331種化合物及其45種代謝物，共375個化合物，其中365種化合物采用正離子模式采集，10種化合物采用負(fù)離子模式采集。圖1中展示了375種化合物的提取離子疊加譜圖，圖2中是單獨10個負(fù)離子化合物的提取離子色譜圖。經(jīng)過優(yōu)化色譜洗脫條件，圖3展示了不同保留時間的部分農(nóng)藥化合物的提取離子色譜圖。各個化合物峰型對稱，軟件中Timed MRM功能自動完成375個化合物的駐留時間分配，保證每個色譜峰上有足夠的采集點數(shù)，以便獲得準(zhǔn)確的結(jié)果及優(yōu)異的重復(fù)性，不同流出時間的代表性化合物的色譜圖采集點數(shù)情況示例詳見圖4。
圖1.375種農(nóng)殘類化合物的MRM疊加譜圖(2ng/ml)(點擊查看大圖)
圖2.10種ESI-模式下采集的化合物的疊加譜圖(2ng/ml)(點擊查看大圖)
圖3.不同流出時間的部分農(nóng)藥化合物的提取離子色譜圖(2ng/ml)(點擊查看大圖)
圖4.不同流出時間代表性化合物的色譜圖采集點數(shù)情況示例(點擊查看大圖)
采用以上3.1前處理步驟，處理陰性蘋果樣品作為空白基質(zhì)，稀釋375種化合物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，制成2ng/mL-200 ng/mL 的系列校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用外標(biāo)法進行定量分析。圖5為隨機挑選的不同流出時間的化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線情況。其中全部化合物在線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系均較好，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.995。
圖5.部分代表性化合物在蘋果基質(zhì)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線情況(點擊查看大圖)
結(jié)果與討論
本文采用LX50 UHPLC-QSight 210三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)建立了快速，高靈敏度和可靠的LC-MS/MS實驗方法測定植物源中331農(nóng)藥化合物及44種代謝物，一針進樣，正負(fù)切換同時檢測，為植物源性基質(zhì)農(nóng)藥化合物的測定提供了可靠的高通量檢測手段，且檢出限遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于標(biāo)準(zhǔn)中的檢出限要求，同時數(shù)據(jù)顯示，其重復(fù)性和線性均較好，為后期高通量樣品的測定提供可靠的保障。
同時該方法優(yōu)化了氟苯蟲酰胺的采集模式，采用負(fù)離子模式進行采集，可以得到較高的靈敏度及重復(fù)性。
珀金埃爾默的QSight三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)具有其獨特專利的HSID自清潔技術(shù)，應(yīng)對各種復(fù)雜的植物源性樣品基質(zhì)，無需清洗維護，即可完成大量樣品分析，大大節(jié)省維護時間及成本。
參考文獻
GB 23200.121-2021《植物源性食品中331種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》
附件
表3.375種農(nóng)殘類化合物質(zhì)譜參數(shù)列表
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