基于比色度/熒光性的蛋白定量方法(總蛋白質/肽含量)：
一、BCA法(測定范圍：5~2000 pg/ml)：基于比色度的蛋白定量方法
原理
蛋白質分子中的肽鍵在堿性條件下能與Cu2+絡合生成絡合物,同時將Cu2+還原成Cu+。二喹啉甲酸及其鈉鹽是一種溶于水的化合物，在堿性條件下，可以和Cu+結合生成深紫色的化合物，這種穩(wěn)定的化合物在562nm處具有強吸收值，并且化合物顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。故可用比色的方法確定蛋白質的含量。
操作步驟
1、繪制標準曲線
以牛血清白蛋白含量為橫坐標，以吸光值為縱坐標。
2、樣品測定
向樣品中加入BCA試劑，搖勻，于37℃保溫30min，冷卻至室溫后在595nm處比色。
3、根據(jù)樣品的吸光值從標準曲線上查出樣品的蛋白質含量。
樣品測定濃度范圍：在5~2000 ug/ml
標準方案：37°C，30分鐘(檢測范圍=20-2000ugmL)
室溫方案：室溫，2小時(檢測范圍=20-2000ug'mL)
增強方案：60°C，30分鐘(檢測范用=5-250mg/mL)
二、Qubit® 法(測定范圍：12.5 μg/mL~5mg/mL)：基于熒光性的蛋白定量方法
原理
Qubit@ 分析試劑盒測定樣品中的可溶性蛋白?？繜晒馊玖吓c蛋白質特意結合后發(fā)出熒光，再檢測產生熒光量的多少來定量。這個方法能把蛋白質與DNA、RNA、降解核酸、游離核苷酸及其它雜質區(qū)分開采用。
操作流程
1、建立標準曲線----樣品處理---讀取分析數(shù)據(jù)；
2、Qubit® 分析試劑盒，能精確定量樣品初始濃度范圍為:12.5 ug/mL~5mg/mL的蛋白質樣本。
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