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不銹鋼細胞生物反應(yīng)器的操作方法

來源:上海百侖生物科技有限公司   2025年04月27日 14:53  
  一、操作前準(zhǔn)備
 
  ‌1、清洗與消毒‌
 
  ‌拆解清洗‌:將反應(yīng)器各部件(罐體、管路、電極等)拆解后,分別用洗潔精和1%氫氧化鈉溶液浸泡清洗,純化水沖洗10次以上。
 
  ‌消毒處理‌:清洗后的部件用消毒液(按比例稀釋)浸泡30分鐘,晾干后避免直接接觸表面。
 
  ‌傳感器維護‌:pH電極浸泡于飽和KCl溶液,溶氧(DO)電極更換電解液并排除氣泡,極化6小時以上。
 
  ‌2、罐體裝配‌
 
  ‌密封安裝‌:將罐蓋與罐體底座對齊,用內(nèi)六角工具對角均勻擰緊螺絲,確保密封性。
 
  ‌管路連接‌:通過硅膠管或快接頭連接補料瓶、排氣瓶、取樣瓶等,電極插入對應(yīng)接口后手動擰緊。
 
  二、上罐操作
 
  ‌1、細胞接種‌
 
  將預(yù)培養(yǎng)的細胞懸液混合均勻后計數(shù),轉(zhuǎn)移至接種瓶并與反應(yīng)器進液管無菌連接。
 
  使用壓縮空氣將細胞懸液壓入反應(yīng)器,避免細胞沉降結(jié)團。
 
  ‌2、參數(shù)初始化‌
 
  ‌環(huán)境設(shè)置‌:溫度設(shè)為37℃(哺乳動物細胞),溶氧40%,pH 7.0左右,通過控制面板啟動自動調(diào)節(jié)。
 
  ‌補料與通氣‌:蠕動泵控制補液速率,進氣系統(tǒng)調(diào)節(jié)氧氣壓力至0.1MPa,確保溶氧穩(wěn)定。
 
  三、培養(yǎng)過程控制
 
  ‌1、動態(tài)監(jiān)測‌
 
  ‌傳感器聯(lián)動‌:實時監(jiān)測溫度、pH、DO等參數(shù),控制器自動調(diào)節(jié)攪拌速度(100–300 rpm)和補料速率。
 
  ‌在線取樣‌:每24小時取樣檢測細胞密度和代謝狀態(tài),取樣后管路末端浸入75%酒精防止污染。
 
  ‌2、污染防控‌
 
  操作全程保持無菌環(huán)境,使用火焰消毒連接口,避免外界雜質(zhì)進入。
 
  四、下罐操作與維護
 
  ‌1、終止培養(yǎng)‌
 
  關(guān)閉自動控制模塊,通過壓縮空氣將培養(yǎng)液排入廢液桶,斷開電極連接。
 
  ‌2、清洗與存儲‌
 
  拆卸罐體組件,用純化水沖洗后以0.1M NaOH溶液浸泡過夜,徹底去除生物殘留。
 
  干燥后存放于通風(fēng)處,電極單獨存放于專用包裝盒。
 
  五、關(guān)鍵注意事項
 
  ‌1、密封性檢查‌:裝配后需進行壓力測試,避免培養(yǎng)過程中泄漏。
 
  ‌2、參數(shù)校準(zhǔn)‌:每次使用前需校正pH和DO電極,確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。
 
  ‌3、規(guī)模放大‌:遵循恒定的通氣體積與液體體積比(VVM),保障溶氧傳遞效率一致。
 
  通過以上步驟,不銹鋼細胞生物反應(yīng)器可實現(xiàn)從實驗室到中試規(guī)模的穩(wěn)定細胞培養(yǎng),適用于抗體生產(chǎn)、疫苗開發(fā)等高精度生物工藝。

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