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ELISA實驗要點:ELISA測定應該如何正確操作

來源:天津天正信達生物科技有限公司   2025年05月21日 08:40  


  ELISA實驗要點:ELISA測定應該如何正確操作


  以下是天正信達生物ELISA實驗的關(guān)鍵操作要點及注意事項:

  一、實驗前準備

  材料選擇?

  優(yōu)先選用高結(jié)合力的聚苯乙烯96孔板

  酶標二抗建議選擇HRP(辣根過氧化物酶)或AP(堿性磷酸酶)標記型

  光敏感試劑(如TMB底物)需避光保存于棕色瓶

  儀器校準?

  移液槍需定期校準,建議配備20μl-1000μl量程槍及多道移液槍


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  二、實驗操作流程

  包被階段?

  使用pH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋抗原/抗體(1-10μg/mL)

  4℃過夜或37℃孵育2小時,確保均勻吸附

  封閉處理?

  推薦5% BSA或脫脂奶粉溶液,200μL/孔封閉1-2小時

  封閉后需用PBST(含0.05% Tween-20)洗滌3-5次

  加樣規(guī)范?

  樣本需梯度稀釋(建議2倍系列稀釋)

  加樣時需對準孔底,避免氣泡或液體濺出

  孵育條件?

  嚴格控制溫度(室溫或37℃)及時間(1-2小時)

  建議使用軌道震蕩儀(500±50rpm)提高結(jié)合效率

  顯色與終止?

  TMB底物反應時間控制在5-30分鐘(觀察顯色強度)

  HRP系統(tǒng)終止使用2M硫酸,AP系統(tǒng)用NaOH

  三、質(zhì)量控制要點

  項目? ?要求?

  洗滌? 每次注滿200μL洗滌液,拍干

  對照組? 必須包含陰性/陽性對照及空白孔

  數(shù)據(jù)讀取? 顯色后15分鐘內(nèi)完成OD值檢測

  注:實驗全程需佩戴手套,避免反復凍融試劑

  以上資料僅供參考,具體請咨詢技術(shù)老師或供應商。

  天津天正信達供應:RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒 、提取試劑盒、色譜進樣瓶、培養(yǎng)基瓶、試劑瓶、胎牛血清、染色液、試劑瓶、QPCR試劑盒、生物試劑、抗體、瓊脂糖、實驗耗材,我司擁有一支覆蓋生物化學、分子生物學、免疫學等專業(yè)人員的研發(fā)、構(gòu)建了儀器設備齊全的實驗技術(shù)平臺,主要包括AKTA、高壓均質(zhì)機、全波長酶標儀、高速落地離心機和qPCR儀等大型儀器設備。

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