ELISA實驗要點：ELISA測定應該如何正確操作

　　以下是天正信達生物ELISA實驗的關(guān)鍵操作要點及注意事項：

　　一、實驗前準備

　　材料選擇?

　　優(yōu)先選用高結(jié)合力的聚苯乙烯96孔板

　　酶標二抗建議選擇HRP(辣根過氧化物酶)或AP(堿性磷酸酶)標記型

　　光敏感試劑(如TMB底物)需避光保存于棕色瓶

　　儀器校準?

　　移液槍需定期校準，建議配備20μl-1000μl量程槍及多道移液槍

　　二、實驗操作流程

　　包被階段?

　　使用pH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋抗原/抗體(1-10μg/mL)

　　4℃過夜或37℃孵育2小時，確保均勻吸附

　　封閉處理?

　　推薦5% BSA或脫脂奶粉溶液，200μL/孔封閉1-2小時

　　封閉后需用PBST(含0.05% Tween-20)洗滌3-5次

　　加樣規(guī)范?

　　樣本需梯度稀釋(建議2倍系列稀釋)

　　加樣時需對準孔底，避免氣泡或液體濺出

　　孵育條件?

　　嚴格控制溫度(室溫或37℃)及時間(1-2小時)

　　建議使用軌道震蕩儀(500±50rpm)提高結(jié)合效率

　　顯色與終止?

　　TMB底物反應時間控制在5-30分鐘(觀察顯色強度)

　　HRP系統(tǒng)終止使用2M硫酸，AP系統(tǒng)用NaOH

　　三、質(zhì)量控制要點

　　項目? ?要求?

　　洗滌? 每次注滿200μL洗滌液，拍干

　　對照組? 必須包含陰性/陽性對照及空白孔

　　數(shù)據(jù)讀取? 顯色后15分鐘內(nèi)完成OD值檢測

　　注：實驗全程需佩戴手套，避免反復凍融試劑

　　以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師或供應商。

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