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土壤 DNA 提取試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟

來源:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司   2025年06月04日 13:30  

本試劑盒能從多類土壤環(huán)境樣本中純化總DNA 。高效的裂解緩沖體系搭配研磨珠,可有效處理真菌、細(xì)菌等土壤中的各類微生物 。獨(dú)te的腐殖酸去除劑,可去除土壤樣本中的腐殖酸和其他抑制因子 。優(yōu)化的 緩沖系統(tǒng)可使核酸高效結(jié)合到吸附柱上,能夠從100-300 mg土壤樣本中快速 、可靠地分離高質(zhì)量完整的 基因組DNA,純化后的DNA 適用于PCR 、酶切和雜交等下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸:

Proteinase K 冰袋(wet ice)運(yùn)輸,-20℃保存;其它試劑室溫運(yùn)輸,室溫儲(chǔ)存,有效期12個(gè)月。

操作步驟:

1. 稱取100-300mg(推薦 250 mg)的土壤樣本至含有500mg研磨珠(1mm)的2mL離心管中;

2. 向離心管中加入 800μL Buffer SA1 、15μL Proteinase K,渦旋振蕩10min;

3. 12,000 rpm~13,400×g)室溫離心 5 min,吸取上清轉(zhuǎn)移至一新的 2mL離心管中(上清中可能會(huì)存 在碎屑,吸入少量不影響提取產(chǎn)物純度);

4. 向離心管加入0.25倍上清體積的 Buffer SLB,渦旋混勻,冰浴 5min;

5. 12,000 rpm~13,400×g)室溫離心5min,吸取上清轉(zhuǎn)移至一新的2mL離心管中,注意不要吸取到 沉淀;

6. 向離心管中依次加入 0.25 倍上清體積 Buffer SGB,0.75 倍上清體積異丙醇(如上清體積600μL ,需先加入150μL Buffer SGB 再加入 450μL 異丙醇) ,上下顛倒混勻;

7. 將上一步的混合液全部轉(zhuǎn)入 DNA Spin Column 中(每次加入量不超過 700 µL,若超過 700 µL 可分批加入),12,000 rpm~13,400×g)室溫離心 1 min,棄濾液,將 DNA Spin Column 放入 Collection tube中;

8.  DNA Spin Column 中加入 600 μL Buffer SD,12,000 rpm~13,400×g)室溫離心 1 min,棄濾液,將 DNA Spin Column 放入 Collection tube 中;

9.  DNA Spin Column 中加入 600 μL Buffer SP(使用前請(qǐng)確認(rèn)已添加無水乙醇),12,000 rpm~13,400 ×g)室溫離心 1 min,棄濾液,將 DNA Spin Column 放入 Collection tube 中;

10.  DNA Spin Column 中加入 600μL PW(使用前請(qǐng)確認(rèn)已添加無水乙醇),12,000 rpm~13,400×g)室溫離心1min,棄濾液,將 DNA Spin Column 放入 Collection tube 中;

11. 重復(fù)步驟 10;

12.  DNA Spin Column 重新置于 Collection tube 后,12,000 rpm~13,400×g)室溫離心2min,取出DNA Spin Column 置于新的1.5mL 離心管上;

13.  DNA Spin Column 開蓋室溫放置 5-10min,盡量使殘留的乙醇揮發(fā)全;

14.  DNA Spin Column 的膜中央懸空加入50-100μL Buffer TE,室溫靜置2min,12,000 rpm~13,400 ×g)室溫離心 2min,收集 DNA 溶液。若要得到更高濃度的 DNA,也可以將第一次的洗脫液重新加 回至 DNA Spin Column 中,室溫靜置2min,12,000 rpm~13,400×g)室溫離心 2min,再次洗脫DNA。


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