液相色譜儀的操作流程有什么？

一、操作前準(zhǔn)備

1. 流動(dòng)相配制與處理

• 流動(dòng)相選擇：根據(jù)分析目標(biāo)（如樣品極性、分離模式）選擇合適的流動(dòng)相（如甲醇 - 水、乙腈 - 水體系），并確保流動(dòng)相純度（使用色譜純?cè)噭?/p>

• 脫氣處理：流動(dòng)相需通過超聲脫氣（20-30 分鐘）或在線脫氣機(jī)去除溶解氣體，避免氣泡進(jìn)入系統(tǒng)導(dǎo)致基線波動(dòng)或泵故障。

• 過濾：使用 0.45 μm 濾膜過濾流動(dòng)相，防止顆粒雜質(zhì)堵塞色譜柱或管路。

2. 樣品制備

• 溶解與過濾：樣品需用流動(dòng)相或相近極性溶劑溶解，并用 0.45 μm 濾膜過濾，避免固體顆粒污染進(jìn)樣器或色譜柱。

• 濃度控制：確保樣品濃度在儀器線性范圍內(nèi)，避免過載導(dǎo)致峰展寬或柱效下降。

3. 儀器檢查

• 管路連接：檢查輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器之間的管路連接是否牢固，避免漏液。

• 色譜柱安裝：確認(rèn)色譜柱類型（如 C18、C8）與分析方法匹配，安裝時(shí)注意流向（通常標(biāo)注 “→”），避免反接。

• 檢測器參數(shù)設(shè)置：根據(jù)樣品特性選擇檢測器（如 UV、RID、FLD），設(shè)定檢測波長、溫度等參數(shù)（如 UV 檢測器需提前預(yù)熱氘燈）。

二、儀器開機(jī)與系統(tǒng)平衡

1. 開機(jī)流程

• 依次開啟計(jì)算機(jī)、液相色譜儀主機(jī)（泵、檢測器等）、工作站軟件，等待儀器自檢完成（注意自檢過程中勿操作管路）。

2. 流動(dòng)相沖洗與系統(tǒng)平衡

• 排空泵頭：打開泵的排液閥，以低流速（如 1 mL/min）沖洗泵頭，直至管路中無氣泡流出（觀察廢液管出口是否有連續(xù)液流）。

• 沖洗色譜柱：關(guān)閉排液閥，以分析方法設(shè)定的流速和流動(dòng)相比例沖洗色譜柱。初始平衡時(shí)間通常為30-60 分鐘，直至基線穩(wěn)定（UV 檢測器基線波動(dòng)≤±0.001 AU）。

• 注意事項(xiàng)：

• 更換流動(dòng)相時(shí)（如從高水相切換為高有機(jī)相），需用中間比例流動(dòng)相過渡（如 50% 有機(jī)相），避免因粘度突變導(dǎo)致泵壓過高。

• 長期未用的色譜柱需先用低流速（0.3-0.5 mL/min）緩慢沖洗，避免干柱導(dǎo)致填料塌陷。

三、進(jìn)樣與分析

1. 進(jìn)樣操作

• 手動(dòng)進(jìn)樣（手動(dòng)進(jìn)樣閥）：

• 將進(jìn)樣閥切換至 “LOAD” 位，用微量注射器吸取適量樣品（通常為進(jìn)樣體積的 2-3 倍），排空氣泡后注入定量環(huán)。

• 快速切換進(jìn)樣閥至 “INJECT” 位，完成進(jìn)樣（動(dòng)作需迅速，避免樣品擴(kuò)散）。

• 自動(dòng)進(jìn)樣（自動(dòng)進(jìn)樣器）：

• 在工作站中設(shè)置進(jìn)樣體積、進(jìn)樣瓶位置等參數(shù)，點(diǎn)擊 “開始進(jìn)樣”，儀器自動(dòng)完成吸樣和進(jìn)樣。

2. 分析過程監(jiān)控

• 觀察基線：進(jìn)樣后實(shí)時(shí)監(jiān)控基線穩(wěn)定性和出峰時(shí)間，若基線漂移或出現(xiàn)異常峰，需排查原因（如流動(dòng)相污染、色譜柱殘留、檢測器故障等）。

• 記錄數(shù)據(jù)：工作站自動(dòng)記錄色譜圖和分析數(shù)據(jù)（保留時(shí)間、峰面積、峰高），如需積分，需設(shè)置合適的積分參數(shù)（如斜率、峰寬閾值）。

四、關(guān)機(jī)與維護(hù)

1. 分析結(jié)束后處理

• 沖洗色譜柱：

• 反相色譜柱（如 C18）：先用高水相流動(dòng)相（如 90% 水 - 10% 有機(jī)相）沖洗 20-30 分鐘，再用純有機(jī)相（甲醇或乙腈）沖洗 30 分鐘，去除殘留雜質(zhì)。

• 正相色譜柱（如硅膠柱）：用正己烷 - 異丙醇體系沖洗，避免水相進(jìn)入柱內(nèi)。

• 沖洗泵和流路：用純甲醇或乙腈以 1 mL/min 流速?zèng)_洗泵和管路 10-15 分鐘，防止鹽類或緩沖液結(jié)晶堵塞系統(tǒng)。

2. 關(guān)機(jī)步驟

• 先關(guān)閉檢測器，再將泵流速降至 0，關(guān)閉泵電源。

• 退出工作站軟件，關(guān)閉計(jì)算機(jī)和儀器主機(jī)電源。

• 若長期不使用儀器，需將色譜柱卸下，用堵頭密封兩端，存放于合適的溶劑中（如 C18 柱存于甲醇中）。

五、常見問題與注意事項(xiàng)

1. 壓力異常

• 壓力過高：可能因色譜柱堵塞、流動(dòng)相粘度高或管路彎折，需逐段排查（如斷開柱前管路，觀察壓力是否下降以判斷柱前或柱后堵塞）。

• 壓力過低：可能因管路漏液、泵頭氣泡或進(jìn)樣閥漏液，需檢查密封圈、排液閥是否擰緊。

2. 基線問題

• 基線漂移：流動(dòng)相未平衡、溫度波動(dòng)或檢測器污染，需延長平衡時(shí)間、控制實(shí)驗(yàn)室溫度或清洗流通池。

• 基線噪聲：氣泡殘留、檢測器燈能量不足或電路干擾，需重新脫氣、更換氘燈或檢查接地。

3. 峰形異常

• 峰展寬：色譜柱老化、柱效下降或進(jìn)樣量過大，需老化色譜柱或減少進(jìn)樣體積。

• 峰分叉 / 拖尾：樣品過載、色譜柱污染或流動(dòng)相 pH 不合適，需調(diào)整濃度、沖洗色譜柱或優(yōu)化流動(dòng)相條件。

六、安全與維護(hù)要點(diǎn)

• 溶劑安全：操作時(shí)需在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，避免吸入有機(jī)揮發(fā)物，及時(shí)清理漏液。

• 定期維護(hù)：

• 每周清洗進(jìn)樣閥定量環(huán)和流路過濾器。

• 每月檢查泵密封圈磨損情況，必要時(shí)更換。

• 每季度對(duì)檢測器流通池進(jìn)行超聲清洗（使用稀硝酸或甲醇）。

• 記錄管理：詳細(xì)記錄儀器使用時(shí)間、流動(dòng)相組成、維護(hù)內(nèi)容等，便于追溯和故障排查。

總結(jié)

液相色譜儀的操作需嚴(yán)格遵循 “準(zhǔn)備充分、進(jìn)樣規(guī)范、維護(hù)及時(shí)” 的原則。通過合理設(shè)置參數(shù)、監(jiān)控分析過程并做好日常維護(hù)，可確保儀器長期穩(wěn)定運(yùn)行，獲得準(zhǔn)確可靠的分析結(jié)果。新手操作時(shí)建議先通過培訓(xùn)掌握基礎(chǔ)流程，并在實(shí)踐中積累故障處理經(jīng)驗(yàn)。