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瓊脂糖電泳槽使用全攻略:從制膠到跑膠的關(guān)鍵技巧與常見問題解析

來源:本生(天津)健康科技有限公司   2025年06月18日 10:03  

  瓊脂糖電泳槽使用全攻略:從制膠到跑膠的關(guān)鍵技巧與常見問題解析

  以下是天津本生技術(shù)小編對(duì)瓊脂糖電泳從制膠到跑膠的全流程操作指南及問題解決方案:

  一、?制膠關(guān)鍵技巧?

  凝膠濃度選擇?

  0.7%-1%膠適用于1-20kb大片段DNA,2%膠用于50-1000bp小片段;

  RNA分析建議使用變性瓊脂糖凝膠(如含甲醛)。

  緩沖液配置?

  TAE緩沖液適合快速電泳(大片段分離),TBE緩沖液分辨率更高(小片段分離);

  緩沖液需現(xiàn)配現(xiàn)用,重復(fù)使用會(huì)導(dǎo)致pH上升、條帶模糊。

  制膠操作?

  微波加熱瓊脂糖至透明(避免局部沸騰),冷卻至60℃再加核酸染料(如GelRed);

  倒膠時(shí)緩慢傾斜模具,避免氣泡產(chǎn)生,梳子垂直插入距底板1mm處。



  二、?電泳運(yùn)行優(yōu)化?

  上樣規(guī)范?

  DNA與Loading Buffer按4:1混合,上樣量≤孔容積80%(避免溢出);

  Marker需預(yù)沉降5分鐘再通電,防止條帶歪斜。

  電泳參數(shù)?

  電壓設(shè)置:5-10V/cm(膠長(zhǎng)度),>20V/cm易致條帶擴(kuò)散;

  溫度控制:常規(guī)DNA電泳<30℃,長(zhǎng)片段(>10kb)建議<15℃。

  緩沖液管理?

  液面需覆蓋凝膠1-2mm,過低會(huì)導(dǎo)致條帶扭曲;

  鉑金電極需定期用蒸餾水清洗,防止鹽結(jié)晶腐蝕。

  三、?常見問題解析?

  問題現(xiàn)象? ?原因分析? ?解決方案?

  條帶模糊/拖尾 DNA降解、緩沖液陳舊或上樣過量 更換緩沖液,減少上樣量,避免核酸酶污染

  帶扭曲 電場(chǎng)不均或梳子拔出不規(guī)范 預(yù)電泳5分鐘(低電壓),垂直緩慢拔梳子

  無條帶顯示 電極接觸不良或DNA未染色 檢查電極連接,確認(rèn)染料活性

  背景熒光雜斑 制膠雜質(zhì)或紫外照射過久 過濾瓊脂糖溶液,縮短紫外觀察時(shí)間

  四、?設(shè)備維護(hù)建議?

  每次使用后需用蒸餾水沖洗槽體及電極,避免緩沖液殘留腐蝕;

  長(zhǎng)期存放時(shí)拆卸梳子與模具,防止塑料變形。

  通過規(guī)范操作與針對(duì)性優(yōu)化,可顯著提升電泳結(jié)果的可重復(fù)性。

  BS-300基礎(chǔ)性電泳儀電源

  BS-600C    通用型電泳儀電源

  BS-mini01  垂直電泳槽(雙板)

  BS-mini04  垂直電泳槽(四板)

  BS-ZY03  轉(zhuǎn)印電泳槽(WB雙板和鉑樂通用)

  BS-ZY04  轉(zhuǎn)印電泳槽 (WB四板)

  BS-sub02 瓊脂糖電泳槽

  注:以上資料僅供參考,具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師。

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