WWW.桔色成人.COM,九九小视频国产片人碰人摸,日本国产高清不卡视频,人人天天日日夜夜狠狠干,亚洲mv大片vs欧洲mv大片,夜夜草美女,中文幕无线码中文字蜜桃,久久给合久久之综合,久热这里只精品99re8久,中文 国产 欧美 日韩,色66,日日舔夜夜操,国产精品长长久久,日日日日做夜夜夜夜无码91,婷婷五月激情视频,91极品在线观看

產品推薦:原料藥機械|制劑機械|藥品包裝機械|制冷機械|飲片機械|儀器儀表|制藥用水/氣設備|通用機械

技術中心

制藥網>技術中心>重點推薦>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

ELISA夾心法實驗步驟和注意事項

來源:天津天正信達生物科技有限公司   2025年06月19日 09:49  

  ELISA夾心法實驗步驟和注意事項


  以下是天正信達ELISA夾心法實驗步驟及注意事項的詳細說明:

  一、實驗步驟?

  抗體包被?

  用pH9.5碳酸鹽緩沖液稀釋捕獲抗體至1-10μg/ml,每孔加入100μl,4℃包被過夜(或37℃ 2小時)。

  棄去孔內液體,用洗滌液(含0.1%吐溫的PBS)洗板3次,每次3分鐘,拍干。

  封閉?

  加入3% BSA或5%脫脂牛奶的封閉液200μl/孔,37℃孵育1小時,封閉非特異性結合位點。

  洗板3次,方法同前。

  加樣與孵育?

  加入待測樣本或標準品100μl/孔,37℃孵育1小時(復雜樣本可延長至2小時)。

  設置空白孔、陰性對照孔和陽性對照孔。

  酶標抗體結合?

  洗板后加入HRP標記的檢測抗體100μl/孔,37℃孵育1小時。

  洗板5次,去除未結合抗體。

  顯色與終止?

  加入TMB底物溶液100μl/孔,避光反應15-30分鐘(觀察顯色程度)。

  加入50μl 2Mls終止反應,顏色由藍變黃。

  檢測?

  終止后15分鐘內用酶標儀測定450nm處OD值(參考波長630nm)。

  二、關鍵注意事項?

  樣本處理?

  血清樣本需離心去除纖維蛋白,避免溶血;組織勻漿需充分裂解后離心取上清。

  NaN3會抑制HRP活性,避免使用含NaN3的樣本或緩沖液。

  溫度控制?

  所有試劑使用前需平衡至室溫(20-25℃),避免溫度差異導致反應速率不均。

  孵育時用不干膠密封板孔,防止蒸發(fā)。

  洗滌操作?

  手工洗板需垂直拍板,避免交叉污染;自動洗板機需檢查洗液管路是否堵塞。

  洗滌后立即加下一步試劑,避免孔板干燥。

  質量控制?

  陽性對照OD值應≥0.8,陰性對照OD值≤0.2,否則實驗無效。

  建議做雙復孔,減少操作誤差。

  試劑保存?

  未開封試劑盒2-8℃保存;濃縮洗滌液結晶需37℃溶解后使用。

  TMB底物需避光保存,現(xiàn)配現(xiàn)用。

  三、常見問題解決?

  高本底值?:檢查封閉是否充分,可延長封閉時間或更換封閉劑(如改用5%脫脂牛奶)。

  顯色過弱?:確認酶標抗體活性及孵育時間,避免顯色底物失效。

  孔間差異大?:校準移液器,加樣時避免氣泡或孔壁殘留。

  如需具體試劑盒參數(shù),請參照產品說明書。

  注:以上資料僅供參考,不作為實際標準,具體請咨詢技術老師。

  天津天正信達供應:RNA逆轉錄試劑盒、逆轉錄試劑盒、PCR試劑盒 、提取試劑盒、色譜進樣瓶、培養(yǎng)基瓶、試劑瓶、胎牛血清、染色液、試劑瓶、QPCR試劑盒、生物試劑、抗體、瓊脂糖、實驗耗材,我司擁有一支覆蓋生物化學、分子生物學、免疫學等專業(yè)人員的研發(fā)、構建了儀器設備齊全的實驗技術平臺,主要包括AKTA、高壓均質機、全波長酶標儀、高速落地離心機和qPCR儀等大型儀器設備。

免責聲明

  • 凡本網注明"來源:制藥網"的所有作品,版權均屬于制藥網,轉載請必須注明制藥網,http://www.emgame.cn。違反者本網將追究相關法律責任。
  • 企業(yè)發(fā)布的公司新聞、技術文章、資料下載等內容,如涉及侵權、違規(guī)遭投訴的,一律由發(fā)布企業(yè)自行承擔責任,本網有權刪除內容并追溯責任。
  • 本網轉載并注明自其它來源的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點或證實其內容的真實性,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內與本網聯(lián)系,否則視為放棄相關權利。

企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618