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ELISA試劑盒的測定方法及要求

來源:天津天正信達生物科技有限公司   2025年06月19日 09:53  

  標簽:Elisa 本生試劑盒 標準品 抗體 封板膜 一次性吸頭

  

  以下是天正信達ELISA試劑盒的測定方法及要求的詳細說明:

  一、測定方法?

  標準品稀釋與加樣?

  在酶標包被板上設標準品孔,加入不同濃度的標準品溶液。

  待測樣本需用稀釋液適當稀釋后加入對應孔中,避免濃度過高影響檢測線性。

  孵育?

  用封板膜密封后置于37℃恒溫環(huán)境孵育30-90分鐘(具體時間依試劑盒說明)。

  孵育時需保持板孔水平,避免液體分布不均。

  洗滌?

  棄去孔內(nèi)液體,每孔加入洗滌液(如含0.05%吐溫-20的PBS)300μl,靜置30秒后棄去,重復4-6次。

  最后一次洗滌后需在吸水紙上拍干,避免殘留液體干擾顯色。

  酶標抗體結合?

  加入HRP標記的檢測抗體或酶結合物工作液(100μl/孔),37℃孵育30-60分鐘。

  顯色與終止?

  加入TMB底物溶液(100μl/孔),避光反應15-30分鐘,觀察顯色梯度。

  加入終止液(50μl/孔)后,顏色由藍變黃,15分鐘內(nèi)測定OD值。

  結果計算?

  以標準品濃度為橫坐標、OD值為縱坐標繪制標準曲線,計算樣本濃度。

  二、實驗要求?

  樣本處理?

  血清/血漿?:需離心(2000-3000rpm,20分鐘)去除纖維蛋白或抗凝劑干擾。

  組織樣本?:需勻漿后離心取上清,避免細胞碎片影響檢測。

  試劑準備?

  濃縮洗滌液需按比例稀釋(如1:20),現(xiàn)配現(xiàn)用。

  酶標抗體和底物需避光保存,使用前平衡至室溫。

  操作規(guī)范?

  加樣時需避免氣泡,液體應加至孔底而非孔壁。

  每步孵育后需嚴格洗滌,減少非特異性結合。

  質量控制?

  需設置空白孔、陰性對照和陽性對照,確保實驗有效性。

  板內(nèi)和板間變異系數(shù)應<15%,標準曲線R2≥0.9900。

  儲存條件?

  未開封試劑盒需2-8℃保存,避免冷凍或高溫。

  開封后微孔板應密封防潮,部分試劑需-20℃保存。

  三、注意事項?

  避免污染?:使用一次性吸頭,不同試劑避免交叉污染。

  顯色控制?:TMB顯色時間過長可能導致本底升高,需及時終止。

  數(shù)據(jù)記錄?:需詳細記錄加樣時間、稀釋倍數(shù)等參數(shù),便于溯源。

  具體操作請以試劑盒說明書為準。

  注:以上資料僅供參考,不作為實際標準,具體請咨詢技術老師。

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