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如何降低ELISA試劑盒實驗誤差概率

來源:天津天正信達(dá)生物科技有限公司   2025年06月23日 11:44  

  標(biāo)簽:Elisa 本生試劑盒 標(biāo)準(zhǔn)品 抗體 封板膜 一次性吸頭 大鼠試劑盒

  

  以下是天正信達(dá)對降低ELISA試劑盒實驗誤差概率的詳細(xì)建議,綜合實驗操作、樣本處理和質(zhì)量控制等關(guān)鍵環(huán)節(jié):

  一、試劑與儀器管理?

  試劑質(zhì)量控制?

  使用前檢查試劑盒有效期,過期試劑不可使用。

  不同批號試劑禁止混用,濃縮洗滌液需現(xiàn)配現(xiàn)用。

  酶標(biāo)抗體和底物避光保存,使用前平衡至室溫(20-25℃)。

  儀器校準(zhǔn)?

  移液器需定期校準(zhǔn)(至少每年1次,高頻使用建議每3-6個月1次)。

  小體積加樣時選擇接近最大量程的移液器,避免使用排槍(易跳孔)。

  二、樣本處理規(guī)范?

  樣本采集與保存?

  血清/血漿:采集后充分凝固(37℃ 1小時或室溫延長),離心(2000-3000rpm,20分鐘)去除纖維蛋白。

  避免溶血、脂血或細(xì)菌污染樣本,此類樣本需預(yù)處理后檢測。

  長期保存需分裝,-20℃以下凍存,避免反復(fù)凍融。

  樣本稀釋?

  高濃度樣本需稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),稀釋倍數(shù)建議<10倍。

  稀釋時充分混勻,避免濃度梯度誤差。

  三、實驗操作優(yōu)化?

  加樣與孵育?

  加樣順序:從低濃度到高濃度,減少跳孔風(fēng)險。

  加樣量精準(zhǔn),避免孔壁殘留或氣泡,每步操作時間控制在10分鐘內(nèi)。

  孵育時密封板孔,37℃恒溫(±0.5℃),避免溫度波動。

  洗滌步驟?

  手工洗板需垂直拍干,自動洗板機檢查管路通暢性。

  洗滌液注滿孔(300μl/孔),洗滌4-6次,去除未結(jié)合物質(zhì)。

  顯色控制?

  TMB顯色避光反應(yīng),時間嚴(yán)格按說明書(通常15-30分鐘)。

  顯色過弱需檢查酶標(biāo)抗體活性,過強可能需縮短時間。

  四、質(zhì)量控制措施?

  對照設(shè)置?

  每板需設(shè)空白孔、陰性對照和陽性對照,驗證試劑和操作有效性。

  陽性對照OD值≥0.8,陰性對照OD值≤0.2,否則實驗無效。

  重復(fù)性與數(shù)據(jù)分析?

  每個樣本做雙復(fù)孔,板內(nèi)變異系數(shù)<15%。

  標(biāo)準(zhǔn)曲線R2≥0.9900,樣本濃度需落在曲線線性范圍內(nèi)。

  五、環(huán)境與細(xì)節(jié)管理?

  溫濕度?:操作環(huán)境溫度15-40℃,濕度15%-85%,孵育時使用濕盒維持穩(wěn)定。

  污染防控?:使用一次性吸頭,避免說話或唾液污染板孔。

  通過以上措施可系統(tǒng)性降低誤差概率,具體參數(shù)需結(jié)合試劑盒說明書調(diào)整。

  注:以上資料僅供參考,不作為實際標(biāo)準(zhǔn),具體請咨詢技術(shù)老師。

  天津天正信達(dá)供應(yīng):RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒 、提取試劑盒、色譜進樣瓶、培養(yǎng)基瓶、試劑瓶、胎牛血清、染色液、試劑瓶、QPCR試劑盒、生物試劑、抗體、瓊脂糖、實驗耗材,我司擁有一支覆蓋生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等專業(yè)人員的研發(fā)、構(gòu)建了儀器設(shè)備齊全的實驗技術(shù)平臺,主要包括AKTA、高壓均質(zhì)機、全波長酶標(biāo)儀、高速落地離心機和qPCR儀等大型儀器設(shè)備。

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