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天正信達解說ELISA試劑盒容易操作失誤的地方

來源:天津天正信達生物科技有限公司   2025年06月24日 09:43  

  天正信達解說ELISA試劑盒容易操作失誤的地方

  以下是天正信達對ELISA試劑盒操作中容易失誤的關鍵環(huán)節(jié)及專業(yè)解決方案,綜合實驗操作要點和常見問題整理:

  一、試劑準備階段

  試劑平衡不足?

  未室溫平衡30分鐘直接使用,導致反應溫度不均(尤其HRP酶在低溫下活性降低)

  解決方案:提前取出試劑盒,平衡至22-25℃后再開封

  標準品復溶錯誤?

  凍干粉未離心溶解或使用非配套稀釋液,造成濃度偏差

  解決方案:復溶前3000rpm離心1分鐘,嚴格按說明書體積稀釋

  二、樣本處理環(huán)節(jié)

  血清分離不當?

  血液未充分凝固(<30分鐘)或離心力不足(<2000g),導致纖維蛋白原殘留引發(fā)假陽性

  解決方案:37℃靜置1-2小時后,3000g離心20分鐘

  樣本保存失誤?

  反復凍融(>3次)或-20℃保存超1個月,使抗原降解

  解決方案:分裝凍存于-80℃,避免凍融循環(huán)

  三、加樣操作要點

  移液器使用錯誤?

  未校準移液器或吸頭密封不嚴,導致加樣量波動(誤差>5%)

  解決方案:每年校準移液器,加樣時吸頭緊貼孔底避免氣泡

  加樣順序混亂?

  先加酶標抗體后加樣本,造成非特異性結(jié)合

  解決方案:嚴格按說明書"樣本→抗體→底物"順序操作

  四、溫育過程控制

  溫度與時間偏差?

  使用普通培養(yǎng)箱(非水浴箱)導致溫度波動>1℃

  解決方案:校準孵育箱溫度,禁止疊放反應板

  蒸發(fā)問題?

  未使用濕盒或封板膜,邊緣孔液體蒸發(fā)致濃度升高

  解決方案:孵育時反應板置于鋪濕紗布的密閉盒內(nèi)

  五、洗滌與顯色

  洗滌不?

  手工洗板拍打力度不均或洗板機針頭堵塞,殘留物增加背景

  解決方案:每孔注滿洗液,靜置1分鐘后拍干

  顯色控制不當?

  顯色超過15分鐘未終止,導致OD值飽和

  解決方案:每隔5分鐘觀察顏色變化,強陽性孔提前終止

  六、數(shù)據(jù)讀取誤區(qū)

  讀板延遲?

  終止反應后>10分鐘讀數(shù),酸性環(huán)境使顯色物分解

  解決方案:終止后5分鐘內(nèi)完成讀數(shù)

  波長設置錯誤?

  TMB底物誤用490nm(正確應為450nm)

  解決方案:核對酶標儀濾光片匹配底物類型

  關鍵建議?:

  每批次實驗設置復孔(CV<15%)和質(zhì)控品

  不同批號試劑禁止混用,開封后1個月內(nèi)用完

  溶血/脂血樣本需離心過濾后檢測

  注:以上資料僅供參考,具體請咨詢技術老師或品牌供應商。

  天津天正信達供應:RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒 、提取試劑盒、色譜進樣瓶、培養(yǎng)基瓶、試劑瓶、胎牛血清、染色液、試劑瓶、QPCR試劑盒、生物試劑、抗體、瓊脂糖、實驗耗材,我司擁有一支覆蓋生物化學、分子生物學、免疫學等專業(yè)人員的研發(fā)、構(gòu)建了儀器設備齊全的實驗技術平臺,主要包括AKTA、高壓均質(zhì)機、全波長酶標儀、高速落地離心機和qPCR儀等大型儀器設備。

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