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高效液相色譜儀的使用注意事項(xiàng)

來源:梁山縣德行二手設(shè)備購(gòu)銷部   2025年06月26日 09:45  

高效液相色譜儀的使用注意事項(xiàng)

高效液相色譜儀(HPLC)的使用需兼顧儀器性能維護(hù)、分析結(jié)果準(zhǔn)確性及操作安全性,以下從開機(jī)準(zhǔn)備、樣品處理、儀器操作、維護(hù)保養(yǎng)等方面梳理關(guān)鍵注意事項(xiàng):

一、開機(jī)前準(zhǔn)備

  • 流動(dòng)相制備

    • 溶劑需使用色譜純級(jí)別(如甲醇、乙腈),水需為超純水(18.2MΩ?cm),避免雜質(zhì)污染色譜柱或檢測(cè)器。

    • 流動(dòng)相使用前必須通過 0.45μm(或 0.22μm)濾膜過濾,有機(jī)相用尼龍膜,水相用醋酸纖維膜,防止顆粒堵塞泵或色譜柱。

    • 流動(dòng)相需脫氣處理:可采用超聲脫氣(20-30 分鐘)、在線脫氣機(jī)或氦氣鼓泡脫氣,避免氣泡導(dǎo)致基線波動(dòng)或泵壓力不穩(wěn)。

  • 系統(tǒng)檢查

    • 確認(rèn)輸液泵、檢測(cè)器、進(jìn)樣器等部件連接管路無漏液、松動(dòng),柱溫箱溫度設(shè)定符合方法要求(如常溫或 30-40℃)。

二、樣品處理

  • 樣品前處理

    • 樣品需溶解,避免混懸顆粒,通過 0.22μm 或 0.45μm 濾膜過濾(針頭濾器),防止堵塞進(jìn)樣閥或色譜柱。

    • 生物樣品(如血清、細(xì)胞裂解液)需離心(10000rpm 以上)后取上清液,必要時(shí)用蛋白沉淀劑(如乙腈)去除蛋白,避免柱污染。

  • 樣品濃度與體積

    • 濃度不宜過高,避免檢測(cè)器飽和或色譜柱過載(峰展寬、拖尾),進(jìn)樣量通常為 5-20μL(根據(jù)方法調(diào)整)。

三、儀器操作規(guī)范

  • 泵系統(tǒng)操作

    • 開機(jī)后先用 10% 甲醇 / 水低流速(如 0.5mL/min)沖洗系統(tǒng) 10-15 分鐘,排除管路氣泡,再逐步升至目標(biāo)流速,避免壓力驟升損壞泵組件。

    • 更換流動(dòng)相時(shí),需注意互溶性:例如從水相切換到正己烷前,需用異丙醇過渡沖洗,防止相分離堵塞系統(tǒng)。

  • 進(jìn)樣器使用

    • 手動(dòng)進(jìn)樣時(shí),進(jìn)樣針需用樣品溶液潤(rùn)洗 3-5 次,進(jìn)樣后迅速切換閥位,避免空氣進(jìn)入系統(tǒng);自動(dòng)進(jìn)樣器需定期清潔進(jìn)樣針和樣品盤,防止交叉污染。

  • 色譜柱維護(hù)

    • 新柱使用前需按說明書用合適溶劑平衡(如 C18 柱用 100% 甲醇沖洗 30 分鐘),避免直接用純水沖洗反相柱(可能導(dǎo)致填料塌陷)。

    • 分析完畢后,用高比例有機(jī)相(如 90% 甲醇 / 水)沖洗色譜柱 30 分鐘,去除殘留雜質(zhì),長(zhǎng)期不用時(shí)需用純甲醇或乙腈封存,柱兩端加堵頭防止干燥。

  • 檢測(cè)器操作

    • 紫外檢測(cè)器(UV):開機(jī)后預(yù)熱 30 分鐘以上,確保光源穩(wěn)定;避免使用流動(dòng)相在檢測(cè)波長(zhǎng)下有強(qiáng)吸收(如 UV220nm 時(shí)避免用甲醇,可選乙腈)。

    • 示差折光檢測(cè)器(RID):需嚴(yán)格控溫(±0.1℃),避免溫度波動(dòng)影響基線;流動(dòng)相需脫氣,防止氣泡干擾。

四、運(yùn)行中監(jiān)控

  • 壓力監(jiān)測(cè)

    • 實(shí)時(shí)關(guān)注柱壓變化:正常壓力波動(dòng)應(yīng)<10%,若壓力驟升可能是柱堵塞(如樣品雜質(zhì)沉積),需降低流速?zèng)_洗或反沖色譜柱;壓力驟降可能是管路漏液,需檢查接口密封。

  • 基線與峰形觀察

    • 基線漂移超過 0.01AU 或出現(xiàn)異常波動(dòng),可能是流動(dòng)相污染、檢測(cè)器污染或氣泡未除盡,需重新處理流動(dòng)相或沖洗系統(tǒng)。

    • 峰形拖尾或分叉可能是柱效下降(填料污染)、樣品過載或流動(dòng)相條件不合適,需優(yōu)化方法或更換色譜柱。

五、關(guān)機(jī)與維護(hù)

  • 系統(tǒng)沖洗

    • 分析結(jié)束后,按以下步驟沖洗系統(tǒng):

    • 泵和進(jìn)樣器管路若使用緩沖鹽(如磷酸鹽),需先用 10% 甲醇 / 水沖洗 30 分鐘去除鹽結(jié)晶,再用純有機(jī)相沖洗,避免鹽析出堵塞管路。

    1. 用流動(dòng)相(不含樣品)沖洗 10-15 分鐘,清除殘留樣品;

    2. 反相色譜柱用 10% 甲醇 / 水沖洗 30 分鐘,再用 100% 甲醇沖洗 30 分鐘封存;正相色譜柱用正己烷沖洗后封存。

  • 部件保養(yǎng)

    • 定期更換泵密封墊(每 1000 小時(shí)或出現(xiàn)漏液時(shí))、進(jìn)樣器針座(每 5000 次進(jìn)樣),清洗檢測(cè)器流通池(用 10% 硝酸水溶液沖洗,再用水和甲醇沖洗)。

    • 色譜柱長(zhǎng)期不用時(shí),需記錄使用時(shí)間和狀態(tài),避免高溫或強(qiáng)光直射。

六、安全與環(huán)保

  • 溶劑安全

    • 操作有機(jī)溶劑時(shí)需在通風(fēng)櫥中進(jìn)行,避免吸入乙腈、四氫呋喃等揮發(fā)性毒物,接觸皮膚后立即用大量清水沖洗。

  • 廢液處理

    • 含重金屬(如離子對(duì)試劑)或有毒溶劑(如氯仿)的廢液需分類收集,交由專業(yè)機(jī)構(gòu)處理,避免直接排放。

七、常見問題應(yīng)對(duì)

  • 柱壓過高:可能是色譜柱污染或篩板堵塞,可嘗試用 10% 異丙醇水溶液低流速(0.3mL/min)反沖色譜柱,或更換保護(hù)柱(預(yù)柱)減少主柱污染。

  • 基線噪聲大:檢查檢測(cè)器燈能量(UV 燈壽命通常 2000 小時(shí))、流動(dòng)相是否變質(zhì),或流通池中有氣泡(可加大流速?zèng)_洗)。

總結(jié)

高效液相色譜儀的規(guī)范使用需貫穿 “防污染、控壓力、穩(wěn)條件” 原則,從流動(dòng)相制備到儀器維護(hù)的每個(gè)環(huán)節(jié)精細(xì)化操作,既能延長(zhǎng)設(shè)備壽命,又能保證分析結(jié)果的可靠性。新手操作時(shí)建議先熟悉儀器說明書,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行驗(yàn)證,遇到故障時(shí)按 “系統(tǒng)排查 - 部件優(yōu)化 - 專業(yè)維修” 的步驟處理。

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