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影響ELISA試劑盒試驗(yàn)成果的要素

來(lái)源:天津天正信達(dá)生物科技有限公司   2025年06月26日 11:25  

  影響ELISA試劑盒試驗(yàn)成果的要素

 

  以下是天正信達(dá)對(duì)影響ELISA試劑盒試驗(yàn)成果的關(guān)鍵要素及控制方法,綜合多篇文獻(xiàn)整理:

  一、試劑相關(guān)因素

  抗體/抗原質(zhì)量‌

  抗體效價(jià)下降或交叉反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性/假陰性

  控制方法:選擇高特異性抗體,避免使用過(guò)期試劑

  酶結(jié)合物濃度‌

  濃度過(guò)高易致背景信號(hào)增強(qiáng),過(guò)低則靈敏度下降

  控制方法:嚴(yán)格按說(shuō)明書稀釋,不同批號(hào)禁止混用

  試劑保存條件‌

  未避光保存或反復(fù)凍融會(huì)使底物失效

  控制方法:開(kāi)封后1個(gè)月內(nèi)用完,酶標(biāo)試劑需-20℃保存

  二、樣本處理因素

  溶血/脂血干擾‌

  血紅蛋白類過(guò)氧化物酶活性會(huì)干擾HRP系統(tǒng)

  控制方法:3000g離心20分鐘去除雜質(zhì)

  反復(fù)凍融‌

  超過(guò)3次凍融可使蛋白降解(尤其細(xì)胞因子)

  控制方法:分裝凍存于-80℃,避免溫度波動(dòng)

  抗凝劑選擇‌

  EDTA會(huì)抑制HRP活性,肝素增加OD值

  控制方法:血清樣本優(yōu)先,血漿需匹配抗凝劑類型

  三、操作技術(shù)要點(diǎn)

  加樣準(zhǔn)確性‌

  移液器未校準(zhǔn)可使誤差>5%(尤其微量樣本)

  控制方法:每年校準(zhǔn)移液器,加樣至孔底1/3處

  溫育控制‌

  溫度波動(dòng)>1℃或未密封會(huì)導(dǎo)致"邊緣效應(yīng)"

  控制方法:使用水浴箱,禁止疊放反應(yīng)板

  洗滌充分性‌

  殘留洗滌液會(huì)增高背景(假陽(yáng)性)

  控制方法:手工洗板需拍干,洗板機(jī)檢查針頭堵塞

  四、儀器與環(huán)境

  酶標(biāo)儀校準(zhǔn)‌

  濾光片波長(zhǎng)偏差(如TMB用450nm非490nm)

  控制方法:開(kāi)機(jī)預(yù)熱15分鐘,定期校驗(yàn)

  溫濕度控制‌

  濕度>70%易致板條受潮,<40%加速液體蒸發(fā)

  控制方法:實(shí)驗(yàn)室維持45%-65%濕度

  五、特殊注意事項(xiàng)

  組織樣本處理‌

  假陽(yáng)性排查‌

  類風(fēng)濕因子干擾需用阻斷劑處理

  驗(yàn)證方法:加標(biāo)回收率測(cè)試(80%-120%)

  關(guān)鍵建議‌:

  每板設(shè)置復(fù)孔(CV<15%)和陰陽(yáng)性對(duì)照

  顯色時(shí)間控制在10-15分鐘,強(qiáng)陽(yáng)性孔提前終止

  優(yōu)先選擇被CNS論文引用的試劑盒品牌

  注:以上資料僅供參考,具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

  天津天正信達(dá)供應(yīng):RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒 、提取試劑盒、色譜進(jìn)樣瓶、培養(yǎng)基瓶、試劑瓶、胎牛血清、染色液、試劑瓶、QPCR試劑盒、生物試劑、抗體、瓊脂糖、實(shí)驗(yàn)耗材,我司擁有一支覆蓋生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等專業(yè)人員的研發(fā)、構(gòu)建了儀器設(shè)備齊全的實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái),主要包括AKTA、高壓均質(zhì)機(jī)、全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀、高速落地離心機(jī)和qPCR儀等大型儀器設(shè)備。

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