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PCR實驗常見問題 解決方案

來源:本生(天津)健康科技有限公司   2025年07月22日 15:53  

  

  以下是PCR實驗常見問題及解決方案的總結,結合實驗關鍵點和優(yōu)化建議:

  1. 無目的條帶擴增?

  可能原因?

  模板過量(超過體系1/10)或裂解產(chǎn)物未稀釋?。

  引物設計問題(如復性溫度不匹配)或引物降解?。

  組織樣品不新鮮或DNA聚合酶失活?。

  解決方案?

  稀釋模板至合適濃度(如1mm3組織樣品)?。

  重新設計引物或優(yōu)化退火溫度(建議50-60℃)?。

  使用新鮮樣品并更換酶制劑?。

  2. 非特異性條帶?

  可能原因?

  鎂離子濃度過高或退火溫度過低?。

  模板污染(如殘留雜質(zhì))或引物二聚體形成?。

  解決方案?

  降低鎂離子濃度(1.5-2.5mM)并提高退火溫度?。

  純化模板或重新設計高特異性引物?。

  3. 污染導致假陽性?

  可能原因?

  實驗室環(huán)境或試劑污染(如氣溶膠殘留)?。

  NTC組出現(xiàn)擴增曲線?。

  解決方案?

  使用10%漂白劑清潔工作臺,分區(qū)操作(試劑配置與模板添加分離)?。

  更換新試劑并驗證無核酸污染?。

  4. 擴增效率低?

  可能原因?

  反應體系未優(yōu)化(如酶活性不足)?。

  循環(huán)數(shù)不足或變性時間過短?。

  解決方案?

  增加循環(huán)數(shù)至35-40輪,延長變性時間至30秒?。

  添加PCR增強劑(如BSA或DMSO)?。

  5. 電泳條帶異常?

  可能原因?

  模板降解或電泳條件不當?。

  引物濃度過高導致引物二聚體?。

   注:以上資料僅供參考,如需進一步技術支持,可聯(lián)系相關供應商?。

  天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業(yè)精神作為標準,以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。

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