本應(yīng)用中作者采用了TSKgel G3000SW尺寸排阻色譜柱參照《英國藥典》和《歐洲藥典》的方法，建立測定人促紅素中二聚體和高分子量物質(zhì)含量的方法。分析結(jié)果顯示：單體峰的保留時(shí)間約為30~35 min。分離度溶液中二聚體與單體峰之間的分離度均大于1.5。以信噪比S/N ≥ 3為檢測限，單體峰濃度檢測限為：0.002 mg/mL。該方法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，可為人促紅素原液及注射劑中二聚體和高分子量物質(zhì)的質(zhì)量控制提供參考。
采用 TSKgel G3000SW 色譜柱測定人促紅素中二聚體及高分子量物質(zhì)
促紅細(xì)胞生成素
(Erythropoietin ; Epo)
【基本信息】
促紅細(xì)胞生成素（EPO）又稱紅細(xì)胞刺激因子、促紅素，是一種人體內(nèi)源性糖蛋白激素， 可刺激紅細(xì)胞生成。缺氧可刺激促紅細(xì)胞生成素產(chǎn)生，已有重組人促紅細(xì)胞生成素用于臨床， 用于治療腎功能不全合并的貧血、獲得性免疫缺陷綜合征/艾滋病本身或治療引起的貧血、惡性 腫瘤伴發(fā)的貧血及風(fēng)濕病貧血等多種貧血。這里采用 TSKgel G3000SW 色譜柱建立了測定人促 紅素二聚體及高分子量物質(zhì)含量的方法。 |
【分析條件】
色譜柱： TSKgel G3000SW（7.8 mm I.D. ×60 cm）
流動(dòng)相： 磷酸鹽緩沖液（磷酸二氫鉀 0.2 g、無水磷酸-氫二鈉 1.2 g 和氯化鈉 23.5 g，加水溶解稀釋 成 1 L，調(diào) pH 至 7.4）
流 速： 0.5 mL/min
進(jìn)樣體積：50 μL
柱 溫： 30 ℃
檢測器： UV @214nm
【溶液配制】
供試品溶液：取供試品，按照供試品的蛋白含量，用流動(dòng)相稀釋成含蛋白 0.4 mg/ml 的溶液，混勻， 作為供試品溶液。
分離度溶液：取 EPO-SEC CRS 歐洲標(biāo)準(zhǔn)品 1 瓶（蛋白含量 100 μg），精密加入 250 μL 流動(dòng)相，用 流動(dòng)相溶解并稀釋制成 0.4 mg/mL 溶液，作為分離度溶液。
對照品溶液：精密量取分離度溶液20 μL，加980 μL流動(dòng)相稀釋成0.008 mg/ml溶液，混勻，作為對 照品溶液。
【分析結(jié)果】
圖 1 HPLC 圖
（A）空白溶液；（B）EPO 分離度溶液
【結(jié)果與討論】
采用TSKgel G3000SW色譜柱參照《英國藥典》和《歐洲藥典》的方法，建立測定人促紅素中 二聚體和高分子量物質(zhì)含量的方法，分析譜圖見圖1。結(jié)果顯示：單體峰的保留時(shí)間約為30~35 min。 分離度溶液中二聚體與單體峰之間的分離度均大于1.5。以信噪比S/N ≥ 3為檢測限，單體峰濃度檢 測限為：0.002 mg/mL 。該方法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，可為人促紅素原液及注射劑中二聚體和高分 子量物質(zhì)的質(zhì)量控制提供參考。
【參考資料】
1. 唐娜，賈麗華，宋莉，陳統(tǒng)華，蘇超男，王嫦鶴，人促紅素中二聚體及高分子量物質(zhì)的質(zhì)量研究 中國醫(yī)藥科 學(xué). 2023, 13(11)：75-812
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