人骨橋蛋白(OPN)檢測(cè)試劑盒,進(jìn)口試劑盒科潤(rùn)達(dá)生物代理(日本IBL 27158)
簡(jiǎn)介
骨橋蛋白(OPN)來(lái)源于骨基質(zhì),是一種分泌型糖蛋白。目前已發(fā)現(xiàn)多個(gè)細(xì)胞分泌高酸性的鈣結(jié)合的糖基化磷蛋白,包括骨細(xì)胞,腎小管細(xì)胞,巨噬細(xì)胞,活化的T細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞。分子量的大小取決于其糖基化和磷酸化程度,范圍為66~44kDa
OPN的一個(gè)重要特點(diǎn)是含RGD序列,如纖維蛋白,連蛋白和其他胞外蛋白,通過(guò)該序列可與細(xì)胞表面整合素受體結(jié)合,如αvβ3
另一重要特點(diǎn),由于RNA連接,糖基化,磷酸化,硫酸化和對(duì)蛋白酶的敏感度不同,OPN在機(jī)體內(nèi)以多種分子形式存在。OPN存在于受傷,炎癥,血管再生和腫瘤組織位點(diǎn)。OPN易水解,這一過(guò)程可能有著重要的生理學(xué)意義。OPN片段的氨基末端含有一個(gè)隱藏的結(jié)合位點(diǎn),可識(shí)別整合素α9β1,而且OPN還含有多個(gè)細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn),與多個(gè)受體反應(yīng);這些反應(yīng)都有著不同的功能
實(shí)驗(yàn)原理
此人骨橋蛋白(OPN)檢測(cè)試劑盒根據(jù)酶免法的夾心原理,利用兩種不同的高特異性抗體,TMB作為著色劑,顏色強(qiáng)度與人OPN的量成正比
兩種抗體如下:
包被抗體:抗人OPN(O-17)兔IgG,抗體反應(yīng)部分,人OPN的N-端標(biāo)記抗體
HRP標(biāo)記的抗人OPN(10A16)小鼠IgG Fab’
檢測(cè)范圍
5~320ng/mL(76.9~4920pmol/mL)
預(yù)期用途
僅供研究,不能用于診斷
1. 此試劑盒可用于EDTA-血漿,尿液或細(xì)胞上清中人OPN的體外定量檢測(cè)。由于OPN分子是不穩(wěn)定的蛋白,請(qǐng)?jiān)谑褂们皩⑵鋬?chǔ)存于-80℃,放置室溫或反復(fù)凍融會(huì)使檢測(cè)值降低
2. 建議EDTA-血漿樣品用EIA緩沖液或PBS5~10倍的稀釋,如果5~10倍的稀釋還是超出了最高標(biāo)準(zhǔn)品值,則需進(jìn)一步稀釋
3. 血清或肝素血漿樣品的檢測(cè)結(jié)果可能不是正確值,因?yàn)?/span>OPN不穩(wěn)定,易被酶裂解,而且OPN分子上有若干個(gè)肝素結(jié)合位點(diǎn),所以肝素血漿也會(huì)影響試驗(yàn)
4. 建議尿液樣品用EIA緩沖液或PBS200倍稀釋,但各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有自有參考的稀釋率。由于尿液樣品易分解,建議加入PMSF(蛋白酶抑制劑)等。樣品采集后不能立即檢測(cè),應(yīng)貯存于-80℃或更低,避免反復(fù)凍融,否則其檢測(cè)值降低。尿液中OPN的量與尿液的體積成反比,建議用肌酸酐補(bǔ)償進(jìn)行檢測(cè)
5. 細(xì)胞上清的稀釋比例因細(xì)胞而異,各實(shí)驗(yàn)室以各自優(yōu)化的稀釋比例稀釋
6. 此試劑盒不能檢測(cè)酶裂解的人OPN
7. 重組的和天然的人OPN都可用此試劑盒檢測(cè)
試劑盒組成
1. 包被板,96孔
2. 標(biāo)記抗體濃縮,30X,0.4mlx1
3. 標(biāo)準(zhǔn)品,0.5mlx2
4. EIA緩沖液,30mlx1
5. 標(biāo)記抗體稀釋液,12mlx1
6. 顯色劑,15mlx1
7. 終止液,12mlx1
8. 洗滌緩沖濃縮液,50mlx1